Полки следовало укомплектовать «проверенными рабочими, служащими, интеллигенцией, коммунистами и комсомольцами, независимо от возраста (непризывных возрастов), но могущими носить оружие». Формирование полков и их боевую подготовку без отрыва от производства производили начальники гарнизонов совместно с горкомами партии, а ответственность за отбор людей возлагалась лично на первых секретарей горкомов ВКП(б). Командиров полков и рот назначали из комсостава запаса старших возрастов и частично кадровых войск. Командирами взводов и отделений назначались «наиболее расторопные, энергичные и смелые товарищи из состава ополчения».
Командиром Ростовского стрелкового полка народного ополчения был назначен Михаил Александрович Варфоломеев — заместитель директора автосборочного завода, ранее работавший председателем исполкома Таганрогского городского совета депутатов трудящихся. Комиссаром — Порфирий Александрович Штахановский. начальник отдела рабочих кадров Управления Северо-Кавказской железной дороги (СКЖД), начальником штаба — Василий Васильевич Плютто, начальник отдела сельского хозяйства Управления рабочего снабжения СКЖД.
Первое время полк состоял из трех стрелковых батальонов трехротного состава и двух специальных рот. Штаб полка располагался в здании Коммунистического университета (в настоящее время — главный корпус Ростовского государственного строительного университета по улице Социалистической, 162). В 1-й батальон принимали рабочих и инженеров заводов «Ростсельмаш» и «Красный Аксай» (разместился в здании управления мясокомбината, затем — в здании базы «Химбыт»). Во 2-й — обувной, мебельной и табачной фабрик, учащихся пожарного техникума (в школе № 60 на Новом поселении, затем — в здании филармонии). В 3-й — паровозоремонтного завода, управления Северо-Кавказской железной дороги, речного порта (в здании средней школы № 43, в настоящее время — профессионально-технического училища № 8, угол проспекта Буденовского и улицы Текучева, затем — в школе № 49)>{24}. Таким образом, в основу структуры полка был положен территориально-производственный принцип. Медицинским персоналом обеспечивал Ростовский медицинский институт. Всего в состав полка вошли представители 150 предприятий и учреждений города.
В полк зачислялись на добровольной основе граждане, не подлежавшие призыву в РККД по каким-то причинам. Немало бойцов и командиров являлись участниками Гражданской войны — Г.К. Репин, Д.И. Казьминин, Ф.Д. Елизаров, П.Н. Юфимцев и другие. Некоторые приходили сразу семьями, с женами и детьми. Общая численность ополченцев неизвестна, так как часть документов полка была утрачена в июле 1942 г. По воспоминаниям очевидцев, она достигала 3 тысяч человек>{25}.
Вплоть до начала октября ополченцы обучались военному делу без отрыва от производства, в свободное от работы время, а 10 октября полк был переведен на казарменное положение. К этому времени его численность составила всего 352 человека, многие ополченцы были призваны в ряды РККА, отозваны на предприятия, выпускавшие оборонную продукцию, эвакуировались с ними в тыл или оказались отчислены как непригодные к воинской службе. В связи с этим полк перешел на двухротный состав батальонов.
15 июля 1941 г. Ростовский обком ВКП(б) принял решение о создании добровольческой Донской казачьей дивизии. Центром формирования стал Сальск, а обеспечение конским составом, продуктами питания и фуражом изначально планировалось осуществлять за счет колхозного фонда области>{26}. Дивизия формировалась на добровольческой основе из жителей области, не подлежавших призыву вследствие возраста, состояния здоровья или по «брони». Первым командиром дивизии стал полковник П.В. Стрепухов, с осени — генерал-майор Я.С. Шарабурко.
Ровно через три месяца, 15 октября 1941 г. областной и городской комитеты ВКП(б) приняли решение о создании еще одного добровольческого полка. Он получил название Коммунистического, так как создавался из коммунистов и комсомольцев города. Его командиром стал кадровый офицер, майор, коммунист Николай Федорович Скачков, начальником штаба — участник Гражданской войны, инструктор обкома партии Иван Дмитриевич Алексеев. Приказом № 0010 по 56-й Отдельной армии от 31 октября 1941 г. в ее состав были включены Ростовская дивизия народного ополчения и коммунистический полк